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為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)精彩呈現(xiàn)首先選定ELISA類(lèi)型，ELISA技術(shù)可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。ELISA試劑盒方法中有三個(gè)必要的試劑：
(1) 固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）
(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱(chēng)為"結(jié)合物"（conjugate）
(3) 酶反應(yīng)的底物
ELISA試劑盒分為以下幾種類(lèi)型，實(shí)驗(yàn)君首先需要根據(jù)自己的待檢物來(lái)確定試劑盒類(lèi)型:
1) 雙抗體夾心法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測(cè)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理，也有雙抗原夾心法測(cè)抗體。
2) 直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測(cè)定抗原總量。此法操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
3) 間接法：間接法是檢測(cè)抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來(lái)檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4) 競(jìng)爭(zhēng)法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。
根據(jù)樣品中檢測(cè)物水平來(lái)選擇ELISA試劑盒:
如果實(shí)驗(yàn)君對(duì)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參考的數(shù)據(jù)，選擇寬動(dòng)力學(xué)檢測(cè)范圍的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低，建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了降低基質(zhì)效應(yīng)，有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠(yuǎn)超過(guò)試劑盒的檢測(cè)范圍（標(biāo)曲范圍）， 也需做適當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋。在zui后計(jì)算結(jié)果時(shí)，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
根據(jù)樣本可獲得性來(lái)選擇ELISA試劑盒:
通常而言，商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供應(yīng)商的試劑盒對(duì)樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很珍貴或較難獲取，則需要認(rèn)真考慮試劑盒對(duì)樣品用量的要求。如果樣品量少，且要做多因子檢測(cè)時(shí)更需謹(jǐn)慎。
ELISA試劑盒細(xì)致比較試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù):
ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實(shí)驗(yàn)君經(jīng)常開(kāi)展ELISA實(shí)驗(yàn)，建議使用同一廠家的試劑盒，這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然前提是實(shí)驗(yàn)條件的一致性)。對(duì)于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的生產(chǎn)廠家使用的抗體對(duì)、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實(shí)力不盡相同，自然不同廠家試劑盒測(cè)出的數(shù)據(jù)會(huì)有差異。