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抗原檢測(cè)出的分子量比資料上的大，是怎么回事？
答：a）抗原形成了二聚體。增多巰基乙醇量，煮沸變性時(shí)間延長，可以打開二聚體。b）蛋白本身的修飾如：糖基化，磷酸化等
 

蛋白轉(zhuǎn)移不到膜上，但膠上有，同時(shí)Marker 轉(zhuǎn)上去了，為什么？
答：可能是：a）樣品濃度過低；b）轉(zhuǎn)移時(shí)間不夠，。

要驗(yàn)證某個(gè)細(xì)胞上有無該蛋白的存在，需要做免疫組化和western blot試驗(yàn)嗎？做這兩個(gè)試驗(yàn)時(shí)的一抗和二抗可以共用嗎？
答：①免疫組化可以用來進(jìn)行定位，但是不能定量，而且有時(shí)會(huì)有假陽性，不易與背景區(qū)分；Western blot可以特異性檢測(cè)某個(gè)蛋白質(zhì)分子，進(jìn)行定量，但是不能定位。
②兩種實(shí)驗(yàn)的一抗有時(shí)候不能通用，公司的產(chǎn)品說明一般都會(huì)說明可以進(jìn)行什么實(shí)驗(yàn)，在免疫組化時(shí)，是否適合石蠟切片或者冰凍切片。
 

細(xì)胞水平要做western blot，多少細(xì)胞提的蛋白夠做western blot？ 
答：一般5×10^6就足夠了
 

同一樣品能同時(shí)提RNA又提蛋白么？這樣對(duì)western blot有無影響？ 
答：能，沒有問題。
 

同一蛋白樣品能同時(shí)進(jìn)行兩種因子的Western Blot檢測(cè)嗎？
答：當(dāng)然可以，有的甚至可以同時(shí)測(cè)幾十種樣品。
 

如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？
答：如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑要溫和得多，這時(shí)加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。

我的樣品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在轉(zhuǎn)膜時(shí)經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)只有一部分蛋白轉(zhuǎn)到了膜上，就是在轉(zhuǎn)膜后染膠發(fā)現(xiàn)有的孔所有的蛋白條帶都在，只是顏色變淡了，有什么辦法可以解決？
答：你可以加大上樣量，沒有問題，還有轉(zhuǎn)移時(shí)你可以用減少電流延長時(shí)間，加20％甲醇