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操作步驟

1、將1個McAb與固相載體連接，形成固相McAb。人ELISA試劑盒洗滌除去未結(jié)合物。

2、同時加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標(biāo)McAb反應(yīng)形成雙抗體夾心復(fù)合物。洗滌除去未結(jié)合物。

3、加底物顯色。

適用于雙抗體夾心法的人ELISA試劑盒，有些也可用雙位點(diǎn)一步法檢測。如HBsAg同樣可用此法進(jìn)行檢測，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清(或血漿)，同時加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的另一個抗HBs(酶結(jié)合物)，如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加入底物，通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結(jié)合物，

加底物后就不顯色。

1.吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
2.液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
3.孵育時要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。
4.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
5.手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
6.吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
7.檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
8.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
9.要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，人ELISA試劑盒溫度環(huán)境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定。
10.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
11.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證。