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動(dòng)物細(xì)胞株瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別
更新時(shí)間:2022-09-05   點(diǎn)擊次數(shù):1796次
  通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株。
  
  動(dòng)物細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
  
  原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細(xì)胞的生長(zhǎng)就會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。
  
  瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別:
  
  瞬時(shí)轉(zhuǎn)染:外源片段的表達(dá)時(shí)間短暫。這主要是因?yàn)橥庠磳?dǎo)入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外形式存在,不能隨細(xì)胞分裂而一同復(fù)制導(dǎo)致拷貝數(shù)被稀釋導(dǎo)致的。
  
  而且考慮到細(xì)胞分裂會(huì)稀釋質(zhì)粒的量,所以起初轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒拷貝數(shù)高。這就導(dǎo)致瞬時(shí)轉(zhuǎn)染呈現(xiàn)一個(gè)高拷貝到低拷貝迅速降低的過(guò)程,且無(wú)法在這個(gè)系統(tǒng)上實(shí)現(xiàn)可誘導(dǎo)表達(dá)。
  
  穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:是相對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染而言,進(jìn)入細(xì)胞的質(zhì)粒整合入細(xì)胞基因組中,并能隨細(xì)胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。在這個(gè)系統(tǒng)中,質(zhì)粒表達(dá)穩(wěn)定,拷貝數(shù)低,且能實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)表達(dá)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并不是一種與瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不同的方法,只是對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行篩選,得到穩(wěn)定整合的動(dòng)物細(xì)胞株。
  
  穩(wěn)定整合的幾率因基因傳遞的方法而異,跨度可以從10^-8到10^-1。因此,對(duì)于有的轉(zhuǎn)染方法,比如化學(xué)試劑介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,其整合幾乎可以忽略不計(jì)。質(zhì)粒載體整合的位點(diǎn)并不是*隨機(jī)分布,依據(jù)不同的基因傳遞方法,呈現(xiàn)不同的靶向傾向性,所以是一種半隨機(jī)整合。
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